酒精灯型号(酒精灯型号规格)

酒精灯种类与规格

实验室是生物学领域必备实验室。如何配置才能成就一个完备的实验室，哪些仪器必不可少，哪些仪器可有可无？

(1)超净工作台

微生物的培养都是在特定培养基中进行无菌培养，那么无菌培养必然需要超净工作台提供一个无菌的工作环境。超净工作台的用途是微生物的接种及处理时的无菌操作。

(2)培养箱

培养箱有多种类型，它的作用在于为微生物的生长提供一个适宜的环境。 培养箱有多种类型，包括生化培养箱，霉菌培养箱，厌氧培养箱等。具体来说区别如下： a. 生化培养箱只能控制温度。可作为一般细菌的平板培养。 b. 霉菌培养箱可以控制温度和湿度。可作为霉菌的培养。 c.CO2培养箱适用于厌氧微生物的培养，例如双歧杆菌。

(3)高压灭菌器

生物学所用到的大部分实验物品、试剂、培养基都应严格消毒灭菌。灭菌锅也有不同大小型号，有些是手动的，有些是全自动的。用户需要根据自己的需要选购。

(4)冰箱

冰箱是实验室保存试剂和样品必不可少的仪器。生物学实验中用到的试剂有些要求是4度保存，有些要求是负20度保存，实验人员一定要看清试剂的保存条件，放置在恰当的温度下保存。具体来说，不同温度下保存的物品如下： a.4℃适合储存某些溶液、试剂、*品等。 b.-20℃适用于某些试剂、*品、配好的抗生素等。 c.-80℃适合某些长期低温保存的样品、大肠杆菌菌种、感受态等的保存。

(5)生物安全柜

生物实验中涉及的试剂和样品微生物有些是有毒的，对于操作人员来说伤害较大。为了防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散，可以利用生物安全柜对操作人员、样品及样品间交叉感染和环境提供安全保护。

(6)摇床

摇床是实验室常用的一种仪器，在微生物实验操作过程中，液体培养基培养细菌时需要在特定温度下振荡使用。

(7)纯水装置

纯水装置包括蒸馏水器和纯水机。蒸馏水器的价格便宜，但在造水过程中需要有人值守;纯水机价格高些，但是使用方便，可以储存一定量的纯水。纯水使用也有不同的级别，实验中配制试剂，配制培养基均需用纯水。

(8)生物显微镜

由于微生物体积较小，所以在观察时需要借助生物显微镜。生物显微镜用于微生物和微小物品结构，形态等的观察。

(9)恒温水浴锅

水浴锅是一种控温装置，水浴控温对于样品来说比较快速且接触充分。有些微生物反应需要在37度，42度，56度下水浴进行，所以恒温水浴锅可以提供需要的温度。

(10)离心机

用于收集微生物菌体以及其他沉淀物。离心机有冷冻和常温之分。有些样品由于在常温下不太稳定，需要低温环境，要视样品的种类而定。

(11)液氮罐

液氮罐储存液氮，可用于细菌、酵母、霉菌和大型真菌等各种微生物的长期保存。以上介绍的是微生物实验室的基本仪器配置，在组建实验室时还需要其他一些耗材，例如酒精灯，试管架，三角瓶，量筒，玻璃试管，灭菌吸管，凉干架，剪刀，镊子，脱脂棉，纱布，试管筐，无菌采样及称样袋，接种环，过滤器等。实验人员可以根据自己的需求为微生物实验室配置合适的仪器和耗材。

(12)冷冻干燥机

主要适用于细菌、微生物、酵母等的干燥。用于干燥保存易脱水的产品，在加水以后能够再次恢复原材料的特性，不影响其生物活性等。通过冷冻干燥，细菌之类的材料成为干燥状态，从而不会发生化学改变。

实验室管理制度

　一、实验室管理制度

1.实验室应制定仪器配备管理、使用制度，*品管理、使用制度，玻璃器皿管理、使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。

2.进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。

3.实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、检修, 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。

4.各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告;*品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出。

5.禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开实验室前认真检查水电，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。

6.负责人严格执行本制度，出现问题立即报告，造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。

二、仪器配备、管理使用制度

1.食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、冷冻干燥设备、恒温水浴箱、生化培养箱，高速离心机。

2.实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。

3.实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，由经理同意填报修理申请、送仪器维修部门。

4.各种仪器(冰箱、温箱除外)，使用完毕后要立即切断电源，旋钮复原归位，待仔细检查后，方可离去。

5.一切仪器设备未经设备管理人员同意，不得外借，使用后按登记本的内容进行登记。

6.仪器设备应保持清洁，一般应有仪器套罩。

7.使用仪器时，应严格按操作规程进行，对违反操作规程的因管理不善致使仪器械损坏，要追究当事者责任。

三、*品管理、使用制度

1.依据本室检测任务，制定各种*品试剂采购计划，写清品名、单位、数量、纯度、包装规格，出厂日期等，领回后建立账目，专人管理，每半年做出消耗表，并清点剩余*品。

2.*品试剂陈列整齐，放置有序、避光、防潮、通风干燥，瓶签完整，剧毒*品加锁存放、易燃、挥发、腐蚀品种单独贮存。

3.领用*品试剂，需填写请领单、由使用人和室负责人签字，任何人无权私自出借或馈送*品试剂，本单位科、室间或外单位互借时需经科室负责人签字。

4.称取*品试剂应按操作规范进行，用后盖好，必要时可封口或黑纸包裹，不使用过期或变质*品。

四、玻璃器皿管理、使用制度

1.根据测试项目的要求，申报玻璃仪器的采购计划、详细注明规格、产地、数量、要求，硬质中性玻璃仪器应经计量验证合格。

2.大型器皿建立账目，每年清查一次，一般低值易耗器皿损坏后随时填写损耗登记清单。

3.玻璃器皿使用前应除去污垢，并用清洁液或2%稀盐酸溶液浸泡24h后，用清水冲洗干净备用。

4.器皿使用后随时清洗，染菌后应严格高压灭菌，不得乱弃乱扔。

五、安全制度

1.进入实验室工作衣、帽、鞋必须穿戴整齐。

2.在进行高压、干燥、消毒等工作时，工作人员不得擅自离现场，认真观察温度、时间，蒸馏易挥发、易燃液体时，不准直接加热，应置水浴锅上进行，试验过程中如产生毒气时应在避毒柜内操作。

3.严禁用口直接吸取*品和菌液，按无菌操作进行，如发生菌液、病原体溅出容器外时，应立即用有效消毒剂进行彻底消毒，安全处理后方可离开现场。

4.工作完毕，两手用清水肥皂洗净，必要时可用新洁尔灭、过氧乙酸泡手，然后用水冲洗，工作服应经常清洗，保持整洁，必要时高压消毒。

5.实验完毕，即时清理现场和实验用具，对染菌带毒物品，进行消毒灭菌处理。6.每日下班，尤其节假日前后认真检查水、电和正在使用的仪器设备，关好门窗，方可离去。

六、环境条件要求

1.实验室内要经常保持清洁卫生，每天上下班应进行清扫整理，桌柜等表面应每天用消毒液擦拭，保持无尘，杜绝污染。2.实验室应井然有序，不得存放实验室外及个人物品、仪器等，实验室用品要摆放合理，并有固定位置。

3.随时保持实验室卫生，不得乱扔纸屑等杂物，测试用过的废弃物要倒在固定的箱筒内，并及时处理。

4.实验室应具有优良的采光条件和照明设备。

5.实验室工作台面应保持水平和无渗漏，墙壁和地面应当光滑和容易清洗。

6.实验室布*要合理，一般实验室应有准备间和无菌室，无菌室应有良好的通风条件，如安装空调设备及过滤设备，无菌室内空气测试应基本达到无菌。

7.严禁利用实验室作会议室及其他文娱活动和学习场所。

实验操作中注意事项

1．由被检验标本或培养物中取材观察细菌形态时，必须使用接种环。接种环系采用一段长约5 ～8cm 硬度适中的镍质电阻丝或特制铂丝，安置在一金属或玻璃棒上制成。无环者则称接种针。

2．接种环或接种针每次使用前后，均须火焰灭菌。即在乙醇灯火焰上彻底烧灼1 次，金属棒或玻璃棒部分亦须转动着通过火焰3 次，用后烧灼时，先将近环处镍丝置于火焰中，使热导向接种环，如直接将环烧灼，则环上残余菌液可因突然受高热而爆烈四溅，有传染危险。待环上菌液蒸发干涸后，再将接种环以垂直方向于火焰中烧灼灭菌，最后再将金属棒或玻璃棒部分往复通过火焰。接种针用后灭菌时与接种环同。

3．接种环（针）经火焰后，需待冷却后再沾取标本或放置于工作台上，以防烫死微生物和烧损桌面。

4．由培养基或试管培养物中沾取标本时，培养瓶口、试管口在打开后及关闭前，应于火焰上通过1 ～2 次，以杀死可能从空气中落入的杂菌和由培养物而来的致病菌。打开瓶塞或试管塞时，应将棉塞上端夹于手指间适当的位置，不得将棉塞任意放置别处。

5．不染色标本和染色标本观察后，应立即投入消毒液内灭菌。

6．使用过玻片，务须彻底消除玻片上的染色细菌后再用，否则再次使用时可能做出错误诊断。

举例：一般*厂的实验室如何配置？

1.环境按*典要求限度实验室，室内环境应为万级*部为百级。那么得需要建立一个万级的洁净区，这是必须的，那么*部百级的话，可以通过百级层流台来实现。

2 进行限度实验和阳性对照实验的话，用到菌种，进行菌种保藏的相关设施。如冰箱，玻璃管，接种环，试管架等需齐备。

3 就是稀释时，需要移液枪，配上各种规格的吸量管等。

4 限度实验一般是要做革兰氏染色的，准备一台显微镜（光学镜即可）及相关设备。

5 既然涉及到菌种了，那么灭菌就是必须得了。如果用量小的话，那么一个小的灭菌锅就够了，如果做得多的话，最好还是买自动化的大容量灭菌柜。另外，平板等玻璃仪器灭菌用的烘箱一台。储存培养基的恒温恒湿箱一台，用于培养细菌霉菌的恒温培养箱各一台，有条件再多买一台阳性对照的专用培养箱。

6 各类培养基和革兰氏染色的*品。

7 平板、锥形瓶等玻璃仪器，酒精灯，平板、吸量管用的灭菌桶。

8 如果要做液体类样品的限度的话，还需过滤器，及真空抽滤系统一套（储水罐、真空泵）。

9  如果用到一些须先溶解再灭菌的培养基的话，还得准备一台电磁炉。

10  还有一些取样用的相关器具，根据实际情况添加。

酒精灯名称

1、准备。旋开壶体上加注酒精的旋塞，通过漏斗把酒精倒入壶体至灯壶总容量的2/5～2/3之间，不得注满，也不能过少。过满易发生危险，过少则灯芯线会被烧焦，影响燃烧效果。拧紧旋塞，不使漏气。

2、注意：由于灯管内的酒精蒸气喷口较细（常见型号直径为0.55毫米），易被灰粒等堵塞，从而难以引燃。因此，每次使用前要检查喷口，如发现堵塞，应该用通针或细钢针将喷口刺通。新灯或长时间未使用的喷灯，点燃前需将灯体倒转2～3次，使灯芯浸透酒精。

3、预热和点火。将喷灯放在石棉板或大的石棉网上（防止预热时喷出的酒精着火），转动空气调节器把入气孔调到最小。向预热盘中注入约2/3容量的酒精并将其点燃。待预热管内酒精受热汽化并从喷管喷出时，预热盘内燃着的火焰就会将喷出的酒精蒸气点燃。有时也需用火柴点燃。

4、当喷口火焰点燃后，再通过空气调节杆调节进气量，使火焰达到所需的温度。在一般情况下，进入的空气越多，火焰温度越高。

5、熄火。停止使用时，可用石棉网或废木板平压覆盖喷管口，灯焰一般即可熄灭。覆盖管口的同时也可用湿布冷却灯座并调大进气量以熄火。稍后，垫一块布（防烫伤）拧松壶体上的旋塞（铜帽），使灯壶内的酒精蒸气放出。

6、喷灯使用完毕，应将剩余酒精倒出。

酒精灯的规格使用方法和注意事项

酒精灯是由灯体，棉灯绳(棉灯芯)，瓷灯芯，灯帽和酒精五大部分所组成。容积：60ml,150ml,250ml和其他规格。火焰：正常使用的酒精灯火焰应分为焰心、内焰和外焰三部分。加热时应用外焰加热。研究表明：酒精灯火焰温度的高低顺序为：外焰>内焰>焰心。理论上一般认为酒精灯的外焰温度最高，由于外焰与外界大气充分接触，燃烧时与环境的能量交换最容易，热量释放最多，致使外焰温度高于内焰。扩展资料使用注意事项：1、酒精灯的灯芯要平整，如以烧焦或不平整，要用剪刀修正。2、添加酒精时，不超过酒精灯容积的2/3；酒精不少于1/3。　　　3、绝对禁止向燃着的酒精灯里添加酒精，以免失火。　　　4、绝对禁止用酒精灯引燃另一只酒精灯，要用火柴点燃。　　　5、用完酒精灯，必须用灯帽盖灭，不可用嘴去吹。参考资料来源：百度百科-酒精灯参考资料来源：百度百科-安全酒精灯

酒精灯的规格

热泉高温细菌分离培养方法

MethodsforIsolationandCultivationofThermophilesinHotSprings

鲜文东1,2，胡超建2，李文均1,2,*

1生命科学学院，中山大学，广州，广东省；2南方海洋科学与工程广东省实验室（珠海），珠海，广东省

*通讯作者邮箱:liwenjun3@mail.sysu.edu.cn

摘要：热泉的温度、酸碱度及营养构成迥异于普通生境，是极端环境的典型代表。其中蕴藏着丰富的微生物资源，它们在长期适应极端生境过程中形成了独特的代谢方式和多样的物种组成，对生命起源与进化等相关理论研究和生物技术开发都有重要意义。热泉一般为小型流动水体，因而泉水中微生物丰度不高。热泉中的微生物主要存在于沉积物及高温菌席中，故在分离培养时常选取沉积物和菌席为研究对象。为了在实验室条件下高效分离培养高温热泉环境中的微生物，了解高温热泉环境中可培养微生物的多样性，并为后续的新分类单元的鉴定、功能菌株的筛选提供优质的种质资源，本文根据前期经验，系统总结了高温热泉微生物的分离培养、初步鉴定及保藏的一般流程，并推荐了两种分离效果较好的培养基及其培养条件，最后对初学者可能忽视的注意事项进行了总结。本文阐述的方法适用于分离热泉中的可培养高温菌，对挖掘热泉中的微生物资源有一定的借鉴意义。

关键词：热泉，高温菌，分离培养，鉴定，保藏

材料与试剂

1.无菌培养皿

2.涂布棒

3.接种针

4.无菌PCR管

5.10ml注射器

6.15ml玻璃试管

7.各种型号的枪头(20μl，200μl，1ml)

8.250ml和1L锥形瓶

9.0.22μm无菌有机系滤膜

10.酒精灯

11.各种型号的移液枪

12.研钵

13.研磨棒

14.R2Abroth(Coolaber)

15.酵母提取物(OXOID)

16.琼脂(Solarbio)

17.吉兰糖胶(Gelrite)

18.琼脂糖（TsingKe）

19.Chelex(Bio-Rad，SIGMA)

20.2xPCRMix(GenStar)

21.27F和1492R引物(SangonBiotech)

22.ddH2O

23.甘油

24.Tris-HClBuffer

25.EDTA

26.Sodiumpyruvate

27.KH2PO4

28.(NH4)2SO4

29.FeSO4·7H2O

30.MgSO4·7H2O

31.CaCl2·2H2O

32.NaCl

33.MnSO4·4H2O

34.ZnSO4·7H2O

35.Co(NO3)2·6H2O

36.CuSO4·5H2O

37.Na2MoO4·2H2O

38.H3BO3

39.TrisodiurnEDTA

40.Nicotinicacid

41.Thiaminehydrochloride

42.Biotin

43.P-aminobenzoicacid

44.Cobalamin

45.Calciumpantothenate

46.Pyridoxinehydrochloride

47.Folicacid

48.R2A(见溶液配方)

49.02YE(见溶液配方)

50.10%Chelex(见溶液配方)

51.微量盐(见溶液配方)

52.复合维生素(见溶液配方)

53.甘油管(见溶液配方)

54.1xTE缓冲液(见溶液配方)

仪器设备

1.超净工作台(BJ-2CD)

2.全温振荡培养箱(ZQZY-88BN)

3.全自动高压灭菌器(HVA-85)

4.隔水式恒温培养箱(GHP-9270)

5.触摸屏梯度PCR仪(T100)

6.台式高速冷冻离心机(5427R)

7.电热鼓风干燥箱(DHG-9140A)

8.凝胶成像系统(GenoSens1850)

9.无损蓝光投射切胶仪(Ultraslim)

软件和数据库

1.EzBioCloud(https://www.ezbiocloud.net/)

2.NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)

实验步骤

一、事前准备：

1.样品：菌席样品N1个，沉积物样品N2个，共N个

2.稀释梯度：10-1、10-2、10-3、10-4，共M个

3.培养基：共X个（O2YE，R2A）

3.10.02%02YE

3.21/10R2A

4.培养温度：45°C，55°C，65°C，共Y个温度梯度

二、材料准备：

需要提前准备并灭菌的材料和试剂有：

1.锥形瓶N个(250ml)，并加入10粒玻璃珠和45ml纯水

2.接种针

3.纯水1L

4.无菌培养皿N×M×X×Y个

5.1ml和200ml枪头若干

6.涂布器若干

7.15ml玻璃试管(有胶塞)N×M个

8.研钵

9.研磨棒

10.甘油管

11.牛奶管

三、分离培养基配制：

根据培养基配方配制适量培养基，高温灭菌后，待培养基冷却至50°C左右，在超净工作台中调至合适pH(样点pH值)，加入1ml/L的复合维生素，充分混匀，倒入无菌培养皿中，凝胶厚度大于培养皿的1/2，过夜风干培养基表面水分。

四、菌席样品和沉积物样品稀释：

1.首先将菌席样品置于事先灭菌的研钵中研磨1分钟(沉积物不需要研磨)，每个样品称取5g转移到灭菌后含有玻璃珠和45ml纯水的锥形瓶中，制成稀释度为10-1，最后置于37°C摇床以180转/分钟转速震荡混匀1小时，使样品充分分散。

2.准备N×M个15ml玻璃试管，用注射器在所有玻璃试管中加入9ml灭菌后的纯水备用。

3.将振荡完成的样品充分摇匀，用移液枪吸取1ml到玻璃试管中，此时稀释梯度为10-2，充分震荡混合，标记样品名和稀释梯度，依次梯度稀释至10-4，每次吸取前注意充分摇匀。

图1.样品梯度稀释

五、样品涂布及分离培养：

样品稀释完成后，从每个玻璃试管中吸取100μl稀释液到培养皿，用涂布棒充分涂匀，涂布过程中平板距离酒精灯火焰3~5厘米,然后在每个培养皿上做好标签，一般需要包含培养基、样点、培养温度、稀释梯度及涂布时间等信息，在超净工作台中正置2小时，使培养基表面的水分充分吸收，最后倒装入保鲜袋中，分别放入45°C，55°C，65°C培养箱置后培养3~7天。

由于热泉微生物生长在高温条件，为了防止培养基水分蒸发过快，用封口膜包裹平板，并在每个保鲜袋内放置一个开放的、盛满水的培养皿，増加保鲜袋内的空气湿度，减缓培养基水分的蒸发。

图2.样品涂布

六、纯化培养基配制：

培养三天后每天观察分离平板，当分离平板上有少许单菌落出现时，可以提前准备纯化培养基，一般选用原浓度的R2A。培养基配制前需观察分离平板上细菌的丰富度，提前估计待纯化的菌株数量，可准备大于或同等数量的培养皿(单板)，或者半数(二分板)和四分之一数量(四分板)。与配制分离培养基类似，待培养基灭菌后，首先调节pH到所需水平，然后加入复合维生素，过夜干燥后备用。

七、菌株的纯化及保藏：

待分离培养皿上的单菌落清晰饱满后，可开始下一步的纯化。先用记号笔在培养皿的底部标记好待纯化的菌株，并将其按顺序编号。挑选的原则是：单菌落必须与周围菌落存在一定的距离，以避免接种针在挑取过程中误触杂菌。另外，尽量全面挑取不同颜色、大小、透明度、边缘特征及表面特征的菌落以避免重复，但比较小的类似菌落可适当多挑，因为这些菌落可能还未完全分化为成熟的形态。挑选完成后，在超净工作台中利用接种针挑取单菌落到纯化板上，采用三区划线法。接种完成后，对每株菌做好标记，一般为分离培养皿编号加上该平板上计数的菌株编号，总编号最好保持在5位数字/字母内，以减少后期记录过程中出现错误，最后放回原培养箱继续培养。

所有纯化后的菌株，挑选2区和3区菌落悬浮于甘油管(20%，w/v)，-80°C保存，用于短期实验接种和种质保藏。

图3.三区画线法

八、菌株初步鉴定：

1.纯化培养皿培养2~3天后，基本会生长出较为明显的菌落，此时可根据菌株的生长状况进行分批测序鉴定。

2.观察并记录每株菌的生长状况、颜色以及特殊形态(颜色，大小，边缘，透明度等)；

3.挑取适量菌体(一个菌落)到装有50μlChelex溶液(10%)的PCR管中。

4.放入PCR仪器中，99°C加热30min或放入99°C水浴锅加热30min，使细菌细胞壁破裂，释放出DNA。

5.短暂离心使细胞碎片及Chelex沉降到PCR管底部，同时上清液基本澄清，此时细菌遗传物质溶解在上清液中。

6.加入1μl上清液至配制好的PCR体系中，离心混匀，放入PCR仪中，特异性扩增细菌DNA中的16SrRNA基因，50μlPCR体系和PCR扩增程序如表1和2所示。

表1.50μlPCR体系

试剂

用量(μl)

ddH2O

22

2×PCRMIX

25

1492R

1

27F

1

模板/空白对照

1

表2.细菌16SrRNA基因的PCR扩增程序

温度

时长

目的

94°C

4min

预变性

94°C

1min

变性

56°C

30s

退火

72°C

1min30s

延伸

循环32次

72°C

10min

延伸

4°C

∞

保存

7.扩增结果检测：PCR扩增产物使用1%琼脂糖凝胶电泳后，在无损蓝光投射切胶仪下回收清晰且片段大小符合(约1500bp)的目标条带，用胶回收试剂盒纯化回收目标条带，并进行16SrRNA基因克隆实验，单克隆产物使用1%琼脂糖凝胶电泳后，用凝胶成像系统(GenoSens1850)检测电泳结果，选择条带清晰且片段大小符合(约1500bp)的单克隆样本完成测序，测序结果在EzBioCloud或NCBI数据库上进行比对，可得到最相似菌株，并根据此结果展开后续实验。

九、后续实验参考：

1.16SrRNA基因克隆及进化树构建。

2.新分类单元的多相分类实验：当菌株与现有物种的相似性小于98.65%时(Kimetal.,2014)，可以认为是潜在新种，有必要进一步开展多相分类实验，具体方法可参考IJSEM杂志(https://www.microbiologyresearch.org/content/journal/ijsem)已发表相关文章。

3.筛选特定功能菌株：将分离平板培养基中的底物替换为羧甲基纤维素钠、微晶纤维素等底物，在高温培养箱中培养，可分离出纤维素降解菌,分离方法和评价标准可参考张靖宜等(2020)的描述。

4.特定类群的代谢产物分析，如热稳定性高温酶研究等。

5.基因组分析。

结果与分析

1.分离效果的评估：

1.1总分离菌株的数量和多样性；

1.2潜在新分类单元的数量及多样性。

2.不同样点、温度和培养基间分离效果的比较。

3.与同一样品的扩增子测序结果比较。

注意事项

1.每天观察培养皿生长情况，注意避免培养皿中琼脂干涸。

2.观察平板时不要直接反转平板，防止培养皿顶部凝结水滴到培养基上，导致菌落间的交叉污染。

3.10%Chelex可以满足大部分细菌16SrRNA基因扩增模板的制备，但个别细菌DNA需要使用小量酶法提取，具体方法可参考Li等(2007)的描述。

溶液配方

1.10%Chelex

将10gChelex溶于90mlTE缓冲液中，121°C高压灭菌25分钟，置于4°C冰箱中保存备用

2.1xTE缓冲液

取5ml1MTris-HClBuffer和1ml0.5MEDTA到500ml烧杯中，搅拌均匀，将PH调整为8,121°C高压灭菌25分钟，室温保存。

3.甘油管的制备

将20ml甘油(丙三醇)加入含有80ml的纯水中，用玻璃棒搅拌混匀，每个甘油管分装0.5~1ml甘油，121°C高压灭菌60min。

4.R2A

R2ABroth0.315g

琼脂粉18g

ddH2O1,000ml

pH根据样点而定

121°C高压灭菌30min

5.02YE

酵母提取物2g

丙酮酸纳1g

KH2PO40.38g

K2HPO40.39g

(NH4)2SO40.5g

复合维生素(溶液配方7)1ml

微量盐5ml

琼脂粉12~18g

ddH2O1,000ml

pH根据样点而定

121°C高压灭菌30min

6.微量盐

FeSO4·7H2O1.11g

MgSO4·7H2O24.65g

CaCl2·2H2O2.94g

NaCI23.4g

MnSO4·4H2O111mg

ZnSO4·7H2O28.8mg

Co(NO3)2·6H2O29.2mg

CuSO4·5H2O25.2mg

Na2MoO4·2H2O24.2mg

H3BO331.0mg

TrisodiurnEDTA4.53g

ddH2O1,000ml

7.复合维生素

Nicotinicacid(烟酸，VB3)100mg

Thiaminehydrochloride(硫胺素，VB1)100mg

Biotin(生物素，V7)5mg

P-aminobenzoicacid(对氨基苯甲酸，VBX)50mg

Cobalamin(钴胺素，VB12)1mg

Calciumpantothenate(泛酸钙，VB5)50mg

Pyridoxinehydrochloride(盐酸吡哆醇，VB6)50mg

Folicacid0.5mg

ddH2O100ml

在超净工作台中用0.22μm的无菌滤膜过滤除菌，配制完成后分装到无菌EP管中，置于4°C冰箱保存备用。

致谢

本文得到国家自然科学基金(91951205)的资助。

参考文献

1.Kim,M.,Oh,H.S.,Park,S.C.andChun,J.(2014).Towardsataxonomiccoherencebetweenaveragenucleotideidentityand16SrRNAgenesequencesimilarityforspeciesdemarcationofprokaryotes. IntJSystEvolMicrobiol64(Pt2):346-351.

2.张靖宜,刘兰,明语真,胡昭钰,邹小娟,刘泽涛,肖敏,李文均.(2020).广东从化温泉水体原核微生物多样性及其酶活筛选.生物资源.42(05):557-567.

3.Li,W.J.,Xu,P.,Schumann,P.,Zhang,Y.Q.,Pukall,R.,Xu,L.H.,Stackebrandt,E.andJiang,C.L.(2007).Georgeniaruaniisp.nov.,anovelactinobacteriumisolatedfromforestsoilinYunnan(China),andemendeddescriptionofthegenusGeorgenia.IntJSystEvolMicrobiol57(Pt7):1424-1428.      

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酒精灯型号规格

酒精灯用95%度左右的酒精。一般情况下，酒精灯里面的酒精用的都是95%浓度的无水酒精，通过实验证明，酒精的浓度越高，燃烧的时候就会越充分，燃点也就会越加旺盛，要是酒精浓度比较低的话，那么就会出现燃烧不顺畅的情况，影响效果。使用酒精灯的注意事项：1、添加酒精时，不能少于酒精灯容积的1/3，也不能超过容积的2/3。2、酒精灯的灯芯要平整，如果已经烧焦或不平整，要用剪刀修正。3、酒精灯只能用灯帽盖灭，不可用嘴去吹。4、如果洒出的酒精在桌面燃烧，应该立即用湿布或沙子扑灭。

酒精灯规格有哪些

你去这里看咯:http://www.02117.com/sproduct/web/product.pl?24=6&2=11http://www.ycyqgz.com/productsf.asp?cpname=玻璃制品自己应该找得到的.

酒精灯型号和厂家

1．酒精灯的使用方法

使用酒精灯时，先要检查灯芯，如果灯芯顶端不平或已烧焦，需要剪去少使其平整，然后检查灯里有无酒精，灯里酒精的体积应大于酒精灯容积的1／4，少于2／3。在使用酒精灯时，应注意，绝对禁止用酒精灯引烧另一盏酒精灯，而应用燃着的火柴或木条来引燃；用完酒精灯，必须用灯帽盖灭，不可用嘴去吹灭，否则可能将火焰沿灯颈压入灯内，引起着火或爆炸。不要碰倒酒精灯，万一洒出的酒精在桌上燃烧起来，不要惊慌，应立即用湿抹布扑盖。

2．给物质加热

酒精灯灯焰分外焰、内焰、焰心三部分，在给物质加热时，应用外焰加热，因为外焰温度最高。

注意：

1）．在用酒精灯加热可以用试管、烧瓶、烧杯、蒸发皿来给液体加热，在加热固体时可用干燥的试管、蒸发皿等，有些仪器如集气瓶、量筒、漏斗等不允许用酒精灯加热。（烧杯不可直接放在火焰上加热）

2）．如果被加热的玻璃容器外壁有水，应在加热前擦拭干净，然后加热，以免容器炸裂。

3）．加热的时候，不要使玻璃容器的底部跟灯芯接触，也不要离得很远，距离过近或过远都会影响加热效果，烧得很热的玻璃容器，不要立即用冷水冲洗，否则可能破裂，也不要立即放在实验台上，以免烫坏实验台。

4）．给试管里的固体加热，应行进行预热，预热的方法是：在火焰上来回移动试管，对已固定的试管，可移动酒精灯，待试管均匀受热后，再把灯焰固定在放固体的部位加热。

5）．给试管里的液体加热，也要进行预热。同时注意液体体积最好不要超过试管体积1／3，加热时，使试管斜一定角度（45°左右），在加热时要不时地移动试管，为避免试管里的液体沸腾喷出伤人，加热时切不可将试管口朝着自己和有人的方向，试管夹应夹在试管的中上部，手应该持试管夹的长柄部分，以免大拇指将短柄按下，造成试管脱落。

6)特别注意在夹持时应该从试管底部往上套，撤除时也应该由试管底部撤出。

分无柄蒸发皿和有柄蒸发皿两种，规格以直径表示，有60~150mm等多种。

主要用途：蒸发液体、浓缩溶液或干燥固体物质。

使用注意事项：能耐高温，但不能骤冷，液体量多时可直接在火焰上加热蒸发。液体量少或粘稠时，要隔着石棉网加热。

1.普通试管：

外径（mm）×长度（mm）规格10×100（小试管，一般收集可燃性气体验纯用）15×150（一般溶液反应用这个型号）20×200（溶液反应用，但用的较少）25×200、30×300（发生装置，例如制取氧气、制氢气简易装置等）

2.具支试管：反应容器

3.离心试管：离心沉淀用

4.硬质石英试管：高温加热用

注：后三种中学很少使用

使用注意事项：

1.普通试管可以直接加热，加热前先将试管外壁水擦干。

2.装溶液时不超过试管容量的1/2，加热时不超过试管的1/3。

3.加热时须用试管夹，试管夹从试管底部向试管口套进，取的时候也从试管下部取出，夹在试管口中上部（接近试管口1/3）。

4.加热时先使试管均匀受热，然后在试管底部集中加热，并不断移动试管。试管应倾斜约45°，管口不要对着自己或他人。

以下为实际操作需要注意的，但考试不会涉及到

5.向试管中倾倒液体，每次只能拿一个试管，但几个试管对比时，可以几个同时拿在手里（用大拇指和手掌）。

6.振荡试管时，拇食中三个手指拿住试管，手腕使劲而不是摆臂，用力振荡。试管里的液体受离心力，不会飞溅出来。

7.加热完的试管不能马上放入试管架，防止烫坏试管架。

8.清洗试管可以直接用清水振荡，也可以用试管刷。如果有必要须沾洗衣粉来刷。根据实验所用的*品，也可以选用酸、碱、酸性重铬酸钾洗液来清洗。清洗后的试管，内壁不应挂有水珠。

酒精灯的分类和区别

酒精灯是以酒精为燃料的加热工具，广泛用于实验室，工厂，医疗，科研等。由于其燃烧过程中不会产生烟雾，因此也可以通过对器械的灼烧达到灭菌的目的。又因酒精灯燃烧过程中产生的热量，可以对其他实验材料加热。它的加热温度达到400—1000℃以上。且安全可靠。1、在用酒精灯加热可以用试管、烧瓶、烧杯、蒸发皿来给液体加热，在加热固体时可用干燥的试管、蒸发皿等，有些仪器如集气瓶、量筒、漏斗等不允许用酒精灯加热。（烧杯·烧瓶不可直接放在火焰上加热，应放在石棉网上加热）2、如果被加热的玻璃容器外壁有水，应在加热前擦拭干净，然后加热，以免容器炸裂。3、加热的时候，不要使玻璃容器的底部跟灯芯接触，也不要离得很远，距离过近或过远都会影响加热效果，烧得很热的玻璃容器，不要立即用冷水冲洗，否则可能破裂，也不要立即放在实验台上，以免烫坏实验台。4、给试管里的固体加热，应行进行预热，预热的方法是：在火焰上来回移动试管，对已固定的试管，可移动酒精灯，待试管均匀受热后，再把灯焰固定在放固体的部位加热。5、给试管里的液体加热，也要进行预热。同时注意液体体积最好不要超过试管体积1/3，加热时，使试管斜一定角度（45°左右），在加热时要不时地移动试管，为避免试管里的液体沸腾喷出伤人，加热时切不可将试管口朝着自己和有人的方向，试管夹应夹在试管的中上部，手应该持试管夹的长柄部分，以免大拇指将短柄按下，造成试管脱落。6、特别注意在夹持时应该从试管底部往上套，撤除时也应该由试管底部撤出。希望我能帮助你解疑释惑。